人生就是博-尊龙凯时为您提供人胃癌细胞MGC803的培养及管理指南。

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：该细胞为贴壁生长。

冻存条件：请使用无血清冻存液（货号：C7001）进行细胞冻存。

培养体系：使用1640培养基加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P）进行培养。

传代方法：首次传代建议按1:2比例进行，通常每2天换液一次。

备注：建议用无菌离心管收集剩余培养基，作为对比培养用。如果对比效果不理想，推荐直接购买我司提供的完全培养基。

二、细胞处理注意事项

在收到细胞后，应将其培养至良好状态后，注入完全培养液并密封瓶口，这样是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，需用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（最好保存40x、100x、200x的图像）。前三天的照片是售后服务的重要依据，如果未提供照片，则默认细胞状态良好。（在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基以便进行对比培养，换液后瓶盖需稍松。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，则需将瓶中完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中继续培养；如果细胞密度超过80%，即可进行传代。传代步骤如下：

1. 放弃培养上清，用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液（约1-2ml）至培养瓶中，放在37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其取回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（例如分装至两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液（约1ml）至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞以促其脱落，再将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混合均匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中保存，如后续需转入液氮罐，则应首先在-80℃冰箱中存放至少24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），快速放入37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶后，再用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天，换成新鲜的完全培养基进行继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中容易脱落，若观察到脱落现象，属于正常现象。如果细胞脱落严重，可将培养瓶内剩余培养液收集到离心管中，1000 RPM离心5分钟，并收集上清作为过渡培养液。接着可添加胰酶（1-2ml），轻轻吹打以重悬，消化1-2分钟，随后加入5ml完全培养基以终止消化，再次离心并重悬于1-2ml完全培养基中。之后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至内，每瓶5-8ml并放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题时可重发的情况有：细胞在运输过程中的丢失、瓶子损坏、培养液严重泄漏等；细胞受到污染，但需在收到产品48小时内提供真实的实验结果；常温发货的细胞在静置24小时后复苏活细胞数量严重不足的情况，需提供清晰的细胞状态照片；如复苏后出现污染的问题；另外，细胞活性问题也可在7天内申请重发。
2. 不予重发的情况包括：客户自身造成的细胞污染或操作不当引起的细胞状态不良；使用非推荐的细胞培养体系等。

如需深入了解细胞培养技巧，欢迎随时咨询人生就是博-尊龙凯时，我们竭诚为您服务。